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荧光定量PCR仪如何选择?

2019-12-11浏览量:1087编辑:来源:

实时荧光定量pcr仪,由荧光定量系统和计算机组成,用来监测循环过程的荧光。与实时设备相连的计算机收集荧光数据。数据通过开发的实时剖析软件以图表的形式显示。原始数据被绘制成荧光强度相关于循环数的图表。原始数据收集后可以开始剖析。实时设备的软件能使收集到的数据进行正常化处理来弥补配景荧光的差别。正常化后可以设定域值水平,这就是剖析荧光数据的水平。

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那如何选择荧光定量PCR仪器呢,可以从以下几个方面着手:

1、仪器使用的广泛水平

  如果不是一个新呈现的仪器品牌,为包管所购置的仪器有充分的可靠性,临床PCR实验室可以从相应仪器在国内外使用的广泛水平来判断。应用越是广泛的仪器,越是经过实践验证的,也就越具有可靠性。
2、仪器的检测通量(反响孔数)
  在购买定量PCR仪的时候需要根据实验室的要求来选择差别通量的仪器。目前市面上的荧光定量PCR仪的检测通量小到16多到384孔,实验室可以根据自己的检测项目和亚游手机app下载状况,选择合适的仪器,没须要追求最腾贵的仪器,一般来说,96孔的通量足够用了;如需寻找新药靶点和疾病标记等类型的实验,则可以考虑购买384孔的仪器。
3、仪器的通道数量
  随着医院开展的项目越来越多,比方基因表达,单核苷酸多态性剖析、高区分率熔解曲线等,那么单通道的仪器则无法满足实验室的需求了,而多通道的设计则能使其更便当地检测多重PCR检测及其衍生的基因表达等其他剖析模式。
4、耗材的开放性
  耗材如扩增反响管的开放性可能会决定日常检测本钱的高低。作为临床PCR实验室,在选择实时荧光PCR仪时,可考虑这一点。不过关于检测HCV等RNA项目的时候,尽量使用去RNAnase酶耗材。
5、硬件设计特点
  荧光定量PCR仪主要有96孔板式和离心式等,每种设计都有它的独到之处,但也都有无法避免的缺陷。
  96孔板的荧光定量PCR仪可以容纳的样本量大,最亚游手机app下载至100ul,并且无需特殊的耗材。古板的96孔板仪器多采用卤钨灯激发、CCD检测。其优点在于:卤钨灯的光强比LED灯强,波长范畴广,关于荧光染料的激发具有十分好的效果,性能比较稳定,使用寿命约3000个小时左右;但CCD的检测通常会因为每个样品孔距光源和检测器的光程各不相同,会爆发边沿效应,对结果爆发一定的影响。为了包管精确、精准的实验结果,这类仪器在实验过程中通常需要配合ROX校正染料,来平衡孔间差别;
离心式的仪器通常选用LED激发、PMT检测,设计上避免了边沿效应,同时PMT检测对荧光信号可以放大或缩小,相关于CCD检测更加灵活,灵敏度更高;但LED的荧光强度比较弱,波长范畴也比较窄,因此,对荧光染料的激发效果不如卤钨灯;
6、运行速度
  在荧光定量PCR仪的众多技术参数中,升降温速度也是十分重要的。更快的升降温,可以缩短反响进行的时间,并且缩短了可能的非特异性结合和反响时间,提高PCR的特异性。可是,运行速度越快,对加热制冷模块的要求越高,因此,稳定性是其保存的最大问题,如果在市面上经过长期考证的,稳定性好的仪器,运行速度越快,带来的便捷越多;
7、灵活性

  在仪器基天性能取得包管的情况下,另外一方面则需要考虑仪器的灵活性,主要包括:仪器运输的灵活性,拆卸的灵活性,软件升级的灵活性,模块更换的灵活性以及使用的灵活性等。



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